人可溶性α–klotho蛋白酶免試驗(yàn)
人可溶性α–klotho蛋白試劑盒產(chǎn)品詳細(xì) | 中文名稱 | 人可溶性α–klotho蛋白試劑盒 | | 英文名稱 | Human soluble alpha-klotho protein kit | | 產(chǎn)品貨號 | 27998 | | 產(chǎn)品規(guī)格 | 96T | | 檢測樣本 | 血清、血漿、尿液 | | 適應(yīng)物種 | 人 | | 預(yù)期用途 | 可用于血清，血漿和尿液中人可溶性α–klotho的定量檢測 | | 產(chǎn)品品牌 | 日本IBL | | 供應(yīng)商家 | 深圳市科潤達(dá)生物工程有限公司 |
人可溶性α–klotho蛋白檢測試劑盒實(shí)驗(yàn)原理
人可溶性α–klotho蛋白檢測試劑盒根據(jù)酶免法的夾心原理，利用兩種不同的高特異性抗體，TMB作為著色劑，顏色強(qiáng)度與人可溶性α–klotho的量成正比
人可溶性α–klotho蛋白試劑盒檢測范圍
93.75~6000pg/mL
人可溶性α–klotho蛋白試劑盒預(yù)期用途
人可溶性α–klotho蛋白試劑盒可用于血清，血漿和尿液中人可溶性α–klotho的定量檢測。
人可溶性α–klotho蛋白試劑盒組成
| 名稱 | 數(shù)量 | 成分 | | 包被板 | 96孔 | 包被有抗人可溶性α–klotho（67G3）小鼠IgG單抗，親和純化 | | 標(biāo)記抗體濃縮30X | 0.4mlx1 | HRP標(biāo)記的抗人可溶性α–klotho小鼠IgG Fab’，親和純化 | | 標(biāo)準(zhǔn)品 | 0.5mlx2 | 重組人可溶性α–klotho | | EIA緩沖液 | 30mlx1 |
| | 標(biāo)記抗體稀釋液 | 12mlx1 | 1%BSA，含0.05%吐溫20的PBS | | 著色劑 | 15mlx1 | TMB底物液 | | 終止液 | 12mlx1 | 1N硫酸 | | 洗滌緩沖濃縮液 40X | 50mlx1 | 含0.05%吐溫20的磷酸緩沖液 |
人可溶性α–klotho蛋白檢測實(shí)驗(yàn)所需材料但試劑盒未提供
■酶標(biāo)儀（450nm）
■移液器和槍頭
■燒杯
■蒸餾水
■孵箱（37±1℃）
■坐標(biāo)紙（對數(shù)-對數(shù)）
■吸水紙
■標(biāo)準(zhǔn)品稀釋管
■洗瓶
■一次性試驗(yàn)管
人可溶性α–klotho蛋白試劑盒實(shí)驗(yàn)步驟
使用前，所有樣品應(yīng)平衡至室溫，大約30min，然后充分混勻，確保試劑質(zhì)量無變化，標(biāo)準(zhǔn)曲線和樣品檢測同時(shí)進(jìn)行
| 試劑 | 檢測樣品 | 標(biāo)準(zhǔn)品 | 檢測樣品對照孔 | 試劑對照孔 | | 檢測樣品100ul | 稀釋標(biāo)準(zhǔn)品（1-7管）100ul | EIA緩沖液（第8管） 100ul | EIA緩沖液100ul | | 蓋板，室溫下溫育60min | | 洗板４次 | | 酶標(biāo)抗體 | 100ul | 100ul | 100ul | - | | 蓋板，室溫下溫育30min | | 洗板４次 | | 顯色劑 | 100ul | 100ul | 100ul | 100ul | | 室溫避光溫育30min | | 終止液 | 100ul | 100ul | 100ul | 100ul | | 加終止液后30min內(nèi)450nm處讀取OD值 |
1.確定好空白對照孔，并在相應(yīng)的微孔中加入100ul EIA緩沖液。
2.確定好樣品對照孔，檢測樣品孔和標(biāo)準(zhǔn)品孔，然后分別將100ul樣品對照品、檢測樣品和稀釋好的標(biāo)準(zhǔn)品加入到相應(yīng)的微孔中。
3.蓋板，室溫下溫育60min
4.在微孔中加入350ul以上的洗滌液，浸泡15-30秒，棄去洗滌液。重復(fù)４次，后在吸水紙上拍干；
5.每孔加100ul酶標(biāo)抗體，除試劑空白對照孔外
6.蓋板，室溫下溫育30min
7.按照步驟4）洗板5次
8.將所需量的顯色劑加入到試管中，然后在每一微孔中加入100ul顯色劑。為了避免污染，請勿將剩余試劑在倒入原裝試劑瓶中。
9.室溫避光溫育30min，加入顯色劑后溶液顏色會(huì)變成藍(lán)色
10.在每孔加100ul終止液，此時(shí)溶液顏色會(huì)變成黃色
11.擦去微孔板底部的污點(diǎn)或水滴，終止液加入后30min內(nèi)，在酶標(biāo)儀450nm處讀數(shù)
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