HMGB1試劑盒（ELISA法）
通用名稱：人高遷移率族蛋白檢測試劑盒（ELISA法）
英文名稱：HMGB1 ELISA
產品規(guī)格：96T
產品貨號：ST51011
產品品牌：德國IBL
HMGB1試劑盒預期用途
HMGB1試劑盒可用于定量測定人血清和血漿中的HMGB1含量。此外，該試劑盒可用于來自牛，豬，兔，小鼠和大鼠的血清，血漿和腦脊液（CSF）的研究。也可以檢測細胞培養(yǎng)基和BALF（支氣管肺泡液）。
前言簡介
HMGB1是大約30kDa的蛋白質，是非組蛋白核蛋白組的主要成分。HMGB1（高遷移族Box1蛋白）是轉錄調節(jié)因子，通常存在于哺乳動物細胞的細胞核和細胞質中。 HMGB1在惡性疾病等疾病的發(fā)病機理中起重要作用。在腫瘤的情況下，細胞的氧供應可以斷開。 這導致細胞死亡（壞死）和釋放HMGB1，進而導致在相鄰腫瘤環(huán)境中形成朝向腫瘤的血管生成。這些血管確保腫瘤的存活和進一步的生長。 體外研究表明，通過定量測定HMGB1濃度，可以區(qū)分病理性細胞死亡（壞死）和生理細胞死亡（細胞凋亡）。在壞死中觀察到更高的HMGB1值。HMGB1在膿毒性休克后期也起重要作用。 結果表明，即使在膿毒性休克后期，HMGB1在動物實驗中的抑制顯著提高了嚙齒動物的存活率。HMGB1通過與RAGE（“晚期糖基化終產物的受體”）結合起作用，具有與細胞因子TNF-α和IL-6相似的促炎作用。 膿毒癥患者血清中也可見高值。血液中的HMGB1濃度在許多其他疾病中也增加，包括類風濕性關節(jié)炎（RA）急性肺損傷（ALI）和彌散性血管內凝血（DIC）。HMGB1 ELISA由Ikuro Maruyama博士和Shino-Test Corporation（日本）開發(fā)。本產品由Shino-Test公司*的IBL制造。
HMGB1試劑盒檢測原理
HMGB1試劑盒是用于定量測定血清和血漿中HMGB1的夾心酶免疫測定。 微量滴定板孔用純化的抗HMGB1抗體包被。樣品中的HMGB1特異性結合固相的抗體，并被第二個酶標記的抗體識別。底物反應后，HMGB1濃度由顏色強度決定。
HMGB1試劑盒組成成分
| 數(shù)量 | 標簽 | 組成 | | 1 x 12 x 8 | MTP | 微孔板可拆卸，包被有抗HMGB1多克隆抗體 | | 1 x | ENZCONJ LYO | 酶標記物 凍干粉含有與過氧化物酶結合的HMGB1，2 。 | | 1 x | CAL LYO | 標準品 凍干粉含有豬HMGB1 ，稀釋見章節(jié)10.1 | | 1 x | CONTROL+ LYO | 陽性質控 凍干粉含有豬HMGB1 ，稀釋見章節(jié)10.1 | | 1 x 20 mL | DILBUF | 稀釋液即用型，含有：緩沖液，0.01 % NaN3. | | 1 x 12 mL | ENZCONJ DIL | 酶標記物稀釋液即用型，含有：緩沖液 | | 2 x 100 mL | WASHBUF CONC | 洗滌液 5X濃縮含有：磷酸鹽緩沖液，<0.5 %Tween 20. | | 1 x 6 mL | COLREA A | 底物液A即用型。 | | 1 x 6 mL | COLREA B | 底物液B即用型 | | 1 x 12 mL | COLOUR STOP | 終止液即用型，含有：0.35M硫酸 | | 2 x | FOIL | 蓋板膜 |
所需材料（未提供）
1. 微量移液器（Multipette Eppendorf或類似設備，CV <3％）。 體積：10; 20; 100; 100-1000μL
2. 渦街攪拌機
3. 軌道搖床（500 rpm）
4. 8通道微量移液器
5. 洗瓶，自動或半自動微量滴定板清洗系統(tǒng)
6. 能夠讀取450nm吸光度的酶標儀（參考波長600-650nm）
7. 雙蒸水或去離子水
8. 紙巾，吸頭和定時器
9. 聚苯乙烯（PS）或聚丙烯（PP）管用于標準和樣品稀釋
10. + 37°C和+ 25°C孵育箱
儲存條件
HMGB1試劑盒在環(huán)境溫度下運輸，儲存應在2-8°C。 遠離熱源或陽光直射。 樣品和制備的試劑的儲存和穩(wěn)定性在相應的章節(jié)中有描述。開封的微量滴定板條在試劑盒的有效期限內保持穩(wěn)定，但應在密封的袋子中儲存在2-8°C。
HMGB1試劑盒檢測步驟
| 1 | 分別加入100ul稀釋液到相應的板孔中。 | | 2 | 分別加入10ul稀釋液到板中的空白孔。 | | 3 | 分別加入10ul標準品，陽性質控及血清或血漿樣本到相應的孔中，短暫搖動30s。 | | 4 | 用蓋板膜蓋板，在+37℃溫育20-24h。 | | 5 | 移去蓋板膜，棄去溶液，用稀釋好的洗滌液400ul/孔洗滌板孔5次，用吸水紙拍干多余的液體。 | | 6 | 每孔加入100ul酶標記物。 | | 7 | 蓋板膜蓋板，+25℃溫育2 h。 | | 8 | 移去蓋板膜，棄去溶液，用稀釋好的洗滌液400ul/孔洗滌板孔5次，用吸水紙拍干多余的液體。 | | 9 | 為了添加顯色液和終止液，如果有的話，可以使用8通道微量移液器。移液應在底物液和終止液加液時的相同時間間隔內進行。使用正位移并避免形成氣泡 | | 10 | 每孔 加入100ul顯色液。 | | 11 | 室溫(18-25°C)孵育30min。 | | 12 | 每孔加入100ul終止液終止反應，將內容物輕輕混合搖勻。 | | 13 | 清理板孔背面。 小心不要劃傷板孔，因為這可能會干擾測量。 | | 14 | 60min內在450nm（參考波長600-650nm）處讀取吸光度值。 |
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