神經(jīng)絲輕鏈蛋白檢測(cè)試劑盒使用酶免法定量檢測(cè)人腦脊液中的神經(jīng)絲輕鏈（NF-light）。該實(shí)驗(yàn)使用兩種高特異性的非競(jìng)爭(zhēng)性單克隆抗體。主要的細(xì)胞骨架成分。對(duì)于保持軸突口徑和形態(tài)的完整十分重要，影響著神經(jīng)傳輸?shù)乃俾屎蜏?zhǔn)確性。存在著三種不同的神經(jīng)絲鏈，根據(jù)其大小而定義，分別為神經(jīng)絲輕鏈、神經(jīng)絲中鏈和神經(jīng)絲重鏈。
神經(jīng)絲輕鏈組成了重鏈的骨架，重鏈聚集形成了神經(jīng)絲纖維。由于直接的創(chuàng)傷或者緩慢的退化過程，受損的神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)容物釋放至周邊的隔室，所以可以定量檢測(cè)軸突蛋白。升高的神經(jīng)絲輕鏈水平已發(fā)現(xiàn)在各類退行性疾病中，例如肌萎縮性[脊髓]側(cè)索硬化、阿爾茨海默病、多發(fā)性硬化和在動(dòng)物模型中的慢性實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎。
神經(jīng)絲輕鏈蛋白檢測(cè)試劑盒利用ELISA夾心法原理。一種特異性單克隆抗體包被在固相表面并連接神經(jīng)絲。通過使用另一種酶標(biāo)記的單克隆抗體進(jìn)行檢測(cè)。通過酶促反應(yīng)使無色的底物液轉(zhuǎn)化為有色產(chǎn)物，顏色的強(qiáng)度與樣本中神經(jīng)絲含量成正比。
神經(jīng)絲輕鏈蛋白（NF-light）檢測(cè)步驟
注意：酶標(biāo)板每次洗滌后應(yīng)在吸水紙上拍干。板子放在800rpm的定軌振蕩器上振蕩是很重要的
1、使用樣本稀釋緩沖液按1:1稀釋CSF樣本，得到總體積小為210?l（做雙孔時(shí)所需的量）。
根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品稀釋表，進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)品的重溶和稀釋。
2、使用洗滌緩沖液洗滌包被板（3次，每次300/l）。加入的洗滌液應(yīng)吸出或者通過在吸水紙上拍干清除。
3、 加入準(zhǔn)備好標(biāo)準(zhǔn)品、樣本各100/l，進(jìn)行雙孔檢測(cè)。于振蕩器（800 rpm）中室溫（20-25）下溫育1小時(shí)。
4、使用洗滌緩沖液洗滌包被板（3次，每次300/l），見步驟2。
5、每孔加入100?l新鮮配制的標(biāo)記物（生物素化的抗NFL 抗體）。于振蕩器（800 rpm）中室溫（20-25）下溫育45分鐘。
6、使用洗滌緩沖液洗滌包被板（3次，每次300/l），見步驟2。
7、每孔加入100/l新鮮配制酶聯(lián)物（HRP標(biāo)記的鏈霉親和素）。于振蕩器（800 rpm）中室溫（20-25）下溫育30分鐘。
8、使用洗滌緩沖液洗滌包被板（3次，每次300/l），見步驟2。
9、每孔加入100/l TMB。于振蕩器（800 rpm）中室溫（20-25）下溫育15分鐘。
10、每孔加入50/l的終止液，并在450nm處（參考波長(zhǎng)620-650 nm）讀數(shù)。注意：終止液含稀釋的硫酸具有腐蝕性。神經(jīng)絲輕鏈蛋白（NF-light）
